病理实验中，实验室骨组织常用的染色方法有哪些？

一、引言 

在病理实验中，骨组织染色起着至关重要的作用。它能够帮助我们清晰地观察骨组织结构、细胞形态以及各种病理变化，为准确诊断骨骼疾病提供关键依据。接下来，我们将介绍病理实验中实验室骨组织常用的染色方法。

二、常用骨组织染色方法介绍 

（一）HE 染色

简述其在组织学中的地位和特点，能区分骨组织结构和骨髓腔中的多种细胞。

HE 染色是组织学中最基础、使用最广泛的染色手段。它可以很好地区分骨组织结构、骨髓腔中的细胞，包括红系、粒系、巨核系、骨膜上的成骨细胞、腔中的破骨细胞、脂肪细胞等。如果仅仅观察性研究，采用 HE 是完全可以的，镜下也基本能够区分这些细胞类型。

说明在观察性研究中的适用性及半定量研究中的局限性。

然而，现在很多科研指标需要量化评价，即半定量研究。特别是研究骨折后骨痂形成过程时，必须采用特殊染色才可以半定量研究。HE 染色显然不能满足要求。

（二）Masson 染色

强调颜色对比鲜明，能反映纤维组织形态，区分新老骨组织。

Masson 染色的颜色对比鲜明，可见明显的胶原纤维网，能较好地反映纤维组织的形态。其中，蓝色表示新形成的骨，红色表示成熟的骨组织。不同修复时期的胶原纤维数量不一样，随着修复时间增长，染色区域逐渐增大表明成熟的骨组织逐渐增加。

指出染色过程中的注意事项，如切片预处理、厚度控制、脱水过程等。

骨 Masson 染色需要注意以下几点：

（1）染色切片预处理：骨组织不同于一般性组织，想要染色好看，必须得控制脱钙环节。病理染色很重要的一点就是要控制切片的 PH 值，对于 Masson 染色来说尤其如此，保持切片 PH 为中性是很有必要的。此外，尽管存在不脱钙骨组织染色法，但个人还是推荐脱钙后再进行 Masson 染色。

（2）切片厚度：推荐骨组织切片厚度为 4μm。太厚则后期染色极易脱片，就算不脱片也会造成染色过深，结构不清晰。太薄，无法完全显示出骨组织的各个层面精细结构。

（3）染色后脱水过程：很多说明书或者文献都会说要梯度乙醇脱水，但也要视情况而定，如果染色较浅，就尽量不要在低浓度乙醇中停留太多时间，尽快转至高浓度乙醇。

（三）亚甲基蓝 - 酸性品红染色

阐述可清晰显示成骨细胞、细胞基质及类骨质。

亚甲基蓝 - 酸性品红染色可以清晰的显示成骨细胞、细胞基质以及类骨质。染色后，植入体表面的羟基磷灰石涂层为紫色，成骨细胞核为深蓝色或深紫色，细胞质基质为淡紫色，紫灰色为新生骨组织。

介绍不同时期骨修复状态下的染色表现。

图片展示了不同时期骨修复的状态，在牵张成骨早期，可见浅紫色的细胞分泌的细胞外基质，深紫色的细胞核，未见明显骨小梁结构。中期，可见骨小梁较细小，骨小梁区比结缔组织区颜色更紫。在牵张成骨后期，见骨小梁较粗壮，周围一圈可见深蓝色成骨细胞，骨小梁边缘处为紫灰色新生骨组织，中心为深紫色的较成熟骨组织。

（四）Von Kossa 染色

说明钙结节形成与新骨生成的关系，以及染色后钙盐沉积区域和细胞核的颜色表现。

钙结节的形成为成骨细胞特有，钙沉积是表明新骨生成的一个证据。钙盐沉积区域为黑色或棕黑色，细胞核表现为蓝色。

通过实例证实其在判断骨缺损修复中的作用。

Von Kossa 染色证实，与无颗粒对照相比，在所有颗粒植入的股骨中有钙沉积的证据。与对照组相比，明显看出植入 HUVEC 和 HBMSC 颗粒的缺损内和周围有钙沉积，颗粒周围有同心堆积，夹杂着类骨质形成，部分是原有骨的残余。

（五）Trap 染色

强调其为破骨细胞标志酶，可鉴别破骨细胞状态。

Trap 染色是用于检测骨组织、骨细胞中特征物质的染色，使破骨细胞呈红色，背景呈绿色或蓝色。抗酒石酸酸性磷酸酶（Trap）为破骨细胞的标志酶，特异地分布于破骨细胞中，为破骨细胞所特有，通常作为鉴别破骨细胞的重要标志物。

展示不同浓度下对破骨细胞分化的影响。

如图可见随着浓度增高，显著刺激破骨细胞分化（RANKL + 组）。总之，Trap 染色可直接鉴别及分析破骨细胞的状态。

（六）茜素红染色

介绍与钙发生显色反应的原理。

茜素红可以与钙发生显色反应，生成深红色的化合物，这样成骨诱导的细胞外面沉积的钙结节也就被染成了深红色。

通过钙结节增加表明材料成骨能力。

很明显观察到，钙结节逐渐增加，表明了材料更优异的成骨能力。

（七）番红 O - 固绿染色

说明可直观反映关节软骨和骨组织结构，以及不同组织与染料结合后的颜色。

番红 O - 固绿染色可直观反映关节软骨、软骨下的骨组织结构，嗜碱性的软骨与碱性染料番红 O 结合呈现红色，嗜酸性的骨和酸性染料固绿结合而成蓝色，在关节软骨及软骨下骨的形态学研究中受到了欢迎。

举例说明其在软骨修复研究中的应用。

代表软骨的红色部分从左至右依次增加，说明材料可以有效促进软骨修复。

三、结论 

在病理实验中，骨组织常用的染色方法各有特点和适用场景。

HE 染色作为组织学中最基础、使用最广泛的染色手段，能区分骨组织结构和骨髓腔中的多种细胞，适用于观察性研究，但在半定量研究中存在局限性。

Masson 染色颜色对比鲜明，能反映纤维组织形态，区分新老骨组织。在染色过程中需要注意切片预处理、厚度控制和脱水过程等，适用于需要区分新老骨组织的研究。

亚甲基蓝 - 酸性品红染色可清晰显示成骨细胞、细胞基质及类骨质，不同时期骨修复状态下的染色表现明显，适用于评估种植体骨界面成骨效果以及血管化程度的研究。

Von Kossa 染色通过钙结节形成与新骨生成的关系，可判断骨缺损修复情况，钙盐沉积区域和细胞核的颜色表现明显，适用于骨生物学研究和病理学诊断等。

Trap 染色作为破骨细胞标志酶，可鉴别破骨细胞状态，展示不同浓度下对破骨细胞分化的影响，适用于研究破骨细胞的相关研究。

茜素红染色与钙发生显色反应，通过钙结节增加表明材料成骨能力，适用于成骨能力研究。

番红 O - 固绿染色可直观反映关节软骨和骨组织结构，不同组织与染料结合后颜色分明，在软骨修复研究中有广泛应用。