一、温控设备至关重要
分子生物学实验对温度的精确控制有着极高的要求,不同的温控设备在实验中发挥着不可或缺的作用。
低温冰箱是分子生物学实验室的重要设备之一。不同控温级别的冰箱满足了各种实验材料的保存需求。4℃冰箱适合储存某些溶液、试剂、药品等;-20℃冰箱适用于某些试剂、药品、酶、血清、配好的抗生素和 DNA、蛋白质样品等;-80℃冰箱则适合某些长期低温保存的样品、大肠杆菌菌种、纯化的样品、特殊的低温处理消化液等的保存。0 - 10℃的冷柜适合低温条件下的电泳、层析、透析等实验。
恒温水浴在分子生物学实验中也起着重要作用。25 - 100℃水浴摇床可用于分子杂交试验,各种生物化学酶反应等试验的保温。25 - 100℃水浴箱用于常规试验。水浴恒温器通过控制水温为生物反应提供稳定的温度环境,确保实验条件的一致性和可重复性。例如在细胞培养过程中,温度是影响细胞生长和分裂的关键因素,水浴恒温器可以为细胞培养提供稳定的温度环境,促进细胞的均匀生长。在 DNA、RNA 的提取、扩增和测序等分子生物学实验中,水浴恒温器用于提供特定温度条件下的热循环,保证实验的顺利进行。
恒温箱在细菌的固体培养和细胞培养中不可或缺。37℃恒温箱用于细菌的平板培养及分子生物学实验。CO2 培养箱适用于培养各种细胞,可恒定地提供一定量的 CO2(通常 5%),用来维持培养液的酸度(pH 值)。37℃恒温空气摇床可进行液体细菌的培养。
液氮罐是分子生物学实验室常用的超低温设备。用于速冻和长期保存实验材料、某些器官组织、细胞株、菌株及纯化的样品等。具有经济、省力和较好地保持细胞生物学特性的优点。例如在分子生物学实验中感受态细胞的制备需要液氮处理,感受态的保存也可以存于液氮中。
二、净化设备保障水质
在分子生物学实验中,水的净化设备起着至关重要的作用。纯水仪作为关键设备之一,能够制作符合分子生物学使用标准的去离子水和超纯水。
实验室纯水机在实验室中具有多种作用。首先,它通过反渗透技术和离子交换技术,能够去除水中的杂质、离子、有机物、重金属等物质,提供高质量的纯水。这种纯水可以用于各种高精度实验和测试,保证实验结果的准确性和可靠性。例如在分子生物学实验中,PCR 反应、蛋白质电泳、核酸测序等对水质要求极高,纯水仪提供的高质量纯水能够避免实验结果受到污染的影响。
优普实验室纯水器采用多级过滤技术,包括颗粒物过滤、活性碳吸附、反渗透膜分离等,有效去除水中的悬浮固体和溶解性有机物,保证水质的高纯度。该纯水器配备了智能化的操作控制系统,可以根据用户需求设定不同的纯水输出参数,并具备自动停机、自清洗、自消毒等功能,操作简便方便。同时,可根据实验室的需要进行定制化配置,例如增加在线 TOC 检测、菌落计数器等功能,满足不同实验的特殊要求。
一种便于使用的分子生物学实验用纯水仪,包括箱体、底座、滑轮、第一水泵、第一消毒器、第二消毒器、过滤器、安装架、排污管、排污阀、顶座、第二水泵等部件。通过第一水泵将水引入,经过第一消毒器和第二消毒器消毒后,再由过滤器进一步净化,最后由第二水泵输出高质量的纯水。其排污阀设计巧妙,能够及时排出过滤器中的杂质,保证纯水质量。
总之,水的净化设备如纯水仪在分子生物学实验中不可或缺,为实验提供高质量的去离子水和超纯水,保障实验结果的准确性和可靠性。
三、消毒设备确保无菌
在分子生物学实验中,消毒设备是确保实验环境无菌的关键。紫外灯、高压锅和干热灭菌锅等设备各自发挥着重要作用。
紫外灯是一种常用的消毒设备,其利用紫外线的杀菌作用,能够有效地杀灭空气中的微生物和物体表面的细菌。例如,在无菌室和超净工作台中,紫外灯常被用于消毒,以减少实验过程中的污染风险。根据搜索到的资料可知,紫外线照射使用方便,但灭菌效果与距离有关,且产生臭氧污染,因此主要用于无菌室、超净台和塑料用具的消毒。一般来说,在使用紫外灯消毒时,应注意人员安全,避免长时间暴露在紫外线下。
高压锅也是分子生物学实验中重要的消毒设备之一。安全使用时高压锅的压力大约 1.2 - 1.8 个标准大气压,与罐装碳酸饮料的压力相当。在初中物理中,我们知道在体积不变的情况下,体系的压强与温度呈正相关。所以,高压锅通过把水封闭起来,使内部气压高于 1 个标准大气压,水的沸点也随之升高并超过 100℃,从而节省了食物煮熟的时间。在分子生物学实验中,高压锅主要用于对一些耐高温的实验器具和物品进行消毒,如玻璃器皿、金属器械等。例如,部分实验中用到的水热反应釜就是加强版的高压锅,它通过金属外壳的保护,可以使反应物在 160℃以内的温度安全反应。
干热灭菌锅则是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关,在菌体受热时,当环境和细胞内含水量越大,则蛋白质凝固就越快,反之含水量越小,凝固缓慢。因此,与湿热灭菌相比,干热灭菌所需温度高(160~170℃),时间长(1~2h)。但干热灭菌温度不能超过 180℃,否则包器皿的纸或棉塞就会烧焦,甚至引起燃烧。干热灭菌锅主要用于对一些不耐高温高压消毒的物品进行灭菌,如玻璃器皿、金属器械等。
总之,紫外灯、高压锅和干热灭菌锅等消毒设备在分子生物学实验中起着至关重要的作用,它们能够有效地确保实验环境的无菌,为实验的准确性和可靠性提供保障。
四、量值设备精准测量
(一)移液器
移液器在分子生物学实验中起着关键作用,主要用于将液体从一个容器转移到另一个容器中,确保实验的准确性和可重复性。根据搜索到的资料,移液器按类型可分为手动移液器、电动移液器、多道移液器和单道移液器;按原理可分为内置活塞式移液器和外置活塞式移液器。实验室大多数使用的是内置活塞式移液器,主要吸取普通溶液或液体。外置活塞式移液器主要用来处理挥发性强、腐蚀或粘稠度高的特殊液体。
移液器具有多种用途:固定体积的移液器用于移取恒定的体积,只能进行一个容量的移液;可调容量式可以对一定范围内的容量进行移液。单道移液器一次只能进行一个孔的加样工作,多通道移液器又称 “排枪”,可进行 8 孔或 12 孔的加样。手动移液器又称微量移液器,需要用大拇指控制按钮进行移液操作,长期重复操作容易疲劳,对手指、手腕、肩膀肌肉损伤大。电动移液器可以说是手动移液器的电子产品,价格相对较高,操作时仅需要轻触按键,比手动移液器更省力,电动移液器功能好,可显示移液次数、预设程序,各种模式转换、设置相对复杂,在大量程移液速度具有优势。
在使用移液器时也有一些注意事项,在吸取液体时不宜急速弹回,在吸取高粘度的液体时操作需更加如此,吸液前应检查管嘴内有无异物;新装的管嘴先吸入液体再排空,如此 2 - 3 次后再进行试验操作。移液器使用温度与校准相差很大的时候,移液器需另行校准。
(二)量筒
量筒是分子生物学实验室中常用的量值设备之一,用于测量液体的体积。常见的量筒规格有 5ml、10ml、15ml、25ml、50ml、100ml、250ml、500ml、1000ml 等。外壁刻度都是以 ml 为单位,10ml 量筒每小格表示 0.2ml,而 50mL 量筒每小格表示 1ml。
量筒是量度液体体积的仪器,常用于实验室和工业生产中。不同规格的量筒适用于不同的容量范围,选择合适的量筒可以提高测量精度。例如在配置试剂时,根据所需液体的体积选择合适规格的量筒,能够确保试剂的准确配比。
(三)pH 计
pH 计在分子生物学实验中用于精确测量溶液的 pH 值。pH 定义为水溶液中氢离子浓度的负对数,pH 值为 7 被认为是中性的,pH 为 0 - 7 的溶液被认为是酸性的,高于 7 到 14 的溶液被称为碱性溶液。在生物系统中,pH 值的重要性不言而喻,许多生物分子在特定的 pH 值下才能发挥良好的功能。
pH 计由两个玻璃管组成,每个玻璃管包含一个电极,一个参比电极和一个传感器电极。参比电极由饱和 KCl 溶液制成,而传感器电极包含 pH 值为 7 的缓冲溶液,涂有氯化银的银线浸入这两种溶液中。传感器电极的末端有一个灯泡,该灯泡由涂有二氧化硅和金属盐的多孔玻璃制成。为了测量溶液的 pH,将该 pH 计浸入溶液中。传感器电极的灯泡接触溶液后,溶液中的氢离子将替换灯泡上的金属离子。这种金属离子的替代导致金属线中的电流流动,该电流由电压表读取。
在使用 pH 计时,需要定期校准设备,以确保读数准确。在配置试剂时,精确测量 pH 值可以保证溶液的准确性,从而为实验的成功提供保障。
五、离心设备分离纯化
(一)冷冻离心机
在分子生物学实验中,冷冻离心机起着至关重要的作用。它能够在低温条件下进行离心分离,适用于对样品温度敏感的应用。例如,在分离细胞、蛋白质、核酸等不同组分的生物医学研究中,冷冻离心机可以帮助研究人员进行高效的样品分离和纯化。在分子生物学实验中,离心是 DNA、RNA 提取、PCR 及凝胶电泳等实验步骤中的重要环节。冷冻离心机可提供低温离心,防止样品受热引起降解,并分离不同形态的核酸分子。在细胞培养实验中,冷冻离心机可用于离心培养基、细胞悬浮液和细胞上清液,以去除细胞或颗粒物质,保留上清液中的溶解物。在蛋白质分析领域,离心是常用的技术之一,用于去除沉淀物和分离不同分子量的蛋白质。冷冻离心机可用于制备清晰的样品,便于后续的蛋白质分析和纯化。
(二)水平离心机
水平离心机在分子生物学实验中也有广泛的应用。例如,在微孔板水平离心机中,主要用于 96 孔或 384 孔板的快速离心,将孔内的液体样本甩向孔底,实现固液分离。当离心机启动时,微孔板以高速度旋转,产生的离心力能够迅速将气泡从液体中甩出,提高实验的效率,减少交叉污染的风险,确保每个样本都在独立的环境中进行处理,保障实验的准确性和可靠性。在生物医药领域,被广泛应用于细胞分离、蛋白质纯化、核酸提取等实验过程中。其高转速、低噪音的设计,能够确保细胞、蛋白质、核酸等生物样品在离心过程中受到最小的损伤,从而保持其生物活性。同时,由于其具备多通道并行处理的能力,可以大大提高实验效率,缩短实验周期。在基因工程领域,也可以帮助研究人员快速、准确地完成 DNA、RNA 等核酸的提取和纯化工作,为基因工程领域的研究提供重要的物质基础。
(三)手掌式离心机
手掌式离心机是一种专为分子生物学家设计的小型离心设备,其特点是小巧轻便,能够被轻松地握持在手中进行离心操作。设计旨在简化常规的低速离心操作,从而降低对价格较高的高速离心机的需求。它还可以用作同位素专用离心机,减少了高速离心机可能受到的污染风险。离心机配备有透明的拱形上盖,使得用户能够实时监测离心过程。使用者可以通过简单的触压式开关来控制离心机的操作,只需按下盖子即可启动离心,而打开盖子则会自动停止离心。尤其适合用于将附着在 Eppendorf 管壁上的液体转移至管底的低速离心操作。内置的温控器能够在仪器长时间运行导致电机温度升高时自动断电,从而延长电机的寿命。
六、电泳设备检测分析
(一)电泳仪的应用
电泳仪是分子生物学研究中不可或缺的重要设备,主要用于对生物样品进行分离和鉴定。在核酸检测方面,电泳技术可根据核酸分子的大小、形状和电荷差异进行分离。例如,琼脂糖凝胶电泳是分子生物学领域中常用的核酸分离方法,通过电泳仪提供稳定的电场,不同大小的核酸片段在凝胶中以不同的速度迁移,从而实现分离。根据搜索到的资料,分子生物学领域中最常用的是琼脂糖凝胶电泳,不同物质由于所带电荷及分子量的不同,在电场中运动速度不同,应用电泳法便可以对不同物质进行定性或定量分析。
在蛋白质检测中,电泳仪同样发挥着重要作用。蛋白质是生物体中重要的功能分子,其结构和功能的研究对于理解生物体的生理和病理过程具有重要意义。电泳技术可以利用电场将蛋白质分子按照其电荷和大小进行分离。例如,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)普遍用于分离蛋白质及较小分子核酸,通过电泳仪控制电场强度和运行时间等参数,可以实现对不同蛋白质的高效分离。
(二)电泳槽的应用
电泳槽是与电泳仪配合使用的设备,为电泳过程提供稳定的环境。在核酸检测中,常见的如用于核酸检测的电泳槽,其槽体设有具有槽口的内腔,内腔的底壁形成有安装台,可用于安装装载琼脂糖胶的载体。在电泳结束后,无需将琼脂糖胶取出,直接开启紫外光源即可判断待检测的核酸分子大小,简单快捷,还能避免核酸染料等对外界造成污染。
在蛋白质检测中,不同类型的电泳槽也有广泛应用。例如,天能电泳槽在 Western Blot 实验中发挥着重要作用。它为蛋白质和核酸的分离提供稳定的平台,电压稳定,电流均匀,使得样本在电泳过程中的运动速度一致,有效避免了样品偏斜和变形,从而保证了分离结果的准确性。在 Western Blot 实验中,天能电泳槽的使用包括样品准备、电泳、转膜和检测等步骤。
此外,pcr 水平电泳槽在 PCR 实验中也有重要应用。适用于 PCR 快速检测及 PCR 引物筛选,电泳速度快,一次可检测 96 个样品,与 PCR 仪 96 孔板相符合,加样迅速,可使用八道排枪式移液器快速加样。同时,该电泳槽在使用过程中有一些注意事项,如通电进入工作状态后禁止人体接触电极等可能带电部分,仪器通电后不要临时增加或拨除输出导线插头等。
DYCP - 33B 琼脂糖水平电泳仪也是实验室常用的电泳槽之一,适用于化工、生物工程等领域。它具有样品容量大、适用范围广、尺寸适中、凝胶板规格合适等特点。
伯乐电泳仪是一种常用于生物化学和分子生物学实验室的仪器,主要用于对生物样品进行分离和鉴定。伯乐电泳仪可以提供多种电泳模式,如常规电泳、脉冲场电泳、等电聚焦等,满足不同实验需求。采用先进的电极设计和控制系统,能够提供高分辨率的电泳条带,具有自动化操作、可重复性好、兼容性强等特点。
七、PCR 仪扩增核酸
PCR 仪,即 DNA 热循环仪,在核酸扩增中起着至关重要的作用。
PCR 技术本质是体外核酸扩增,通过精确控制温度循环,实现 DNA 的变性、引物结合和延伸过程,从而呈指数级扩大待测样本中的核酸拷贝数。
在核酸检测中,PCR 仪可以将采集到的样本经过一系列前处理设备处理后进行扩增,最终得到核酸检测的结果。例如,在新冠病毒核酸检测处理中,实验人员将采集到的 “咽拭子”、“鼻拭子” 等样本,通过提前、分离、检验等步骤后,放入 PCR 仪中扩增,方便后续检测。因为当采集到的样品含量太低时,通过 PCR 仪可将样品扩增数倍,起到信号放大的作用。
PCR 仪不仅可以进行定性检测,还能实现定量检测。通过在 PCR 反应中加入荧光探针或染料,PCR 仪可以实时监测 PCR 反应的进程,并根据荧光信号的强度来判断目标 DNA 的存在和数量。这种实时定量 PCR(qPCR)技术被广泛应用于基因表达分析、病原体检测、遗传疾病诊断等领域。
PCR 仪有多种类型,按扩增目的和检测标准来分,有普通 PCR 仪、梯度 PCR 仪、原位 PCR、实时荧光定量 PCR 仪等几类。普通 PCR 仪一次 PCR 扩增只能运行一个特定退火温度;梯度 PCR 仪可以设置一系列不同的退火温度条件,单次扩增效率更高;原位 PCR 能够保持细胞或组织的完整性,使 PCR 反应体系渗透到组织和细胞中;实时荧光定量 PCR 仪是在普通 PCR 仪设计基础上增加荧光信号采集系统和计算机分析处理系统,具有高灵敏度、高精度和高重复性等优点。
总之,PCR 仪在核酸扩增中具有不可替代的重要性,为分子生物学研究和临床诊断等领域提供了强大的技术支持。
八、凝胶成像系统观察分析
凝胶成像系统在分子生物学实验中扮演着至关重要的角色,主要用于电泳结果的观察、拍照和分析。
其工作原理是通过特定的光源照射样品,如紫外光常用于激发 DNA 或 RNA 凝胶中的荧光染料(如 EB、SYBR Green 等),可见光则用于观察经过染色(如考马斯亮蓝染色)的蛋白质凝胶,蓝光或绿光可用于激发某些荧光蛋白或其他荧光标记物。成像装置通常采用 CCD 相机或 CMOS 相机,利用电荷耦合器件或互补金属氧化物半导体来捕捉荧光或可见光下的图像。系统一般配备暗箱,以屏蔽外部光源干扰,确保成像质量。
在图像捕获过程中,可调整曝光时间和强度以获得最佳的图像对比度,调整相机焦距确保图像清晰,然后在合适的条件下拍摄凝胶图像。
对于图像处理与分析,首先进行图像预处理,包括去除图像背景噪声使目标条带更加明显,以及将图像中的各个条带分开便于后续定量分析。定量分析方面,通过扫描条带的灰度值或荧光强度,评估条带的相对密度或荧光强度。例如,对于一般常用的 DNA 胶片,利用分子量定量功能,通过对胶上 DNA Marker 条带的已知分子量注释,自动生成拟合曲线,并以它衡量得到未知条带的分子量,这种方法得到的结果比肉眼观察估计要准确很多。此外,还可以先将 DNA 胶片上某一已知其 DNA 含量的标准条带进行密度标定以后,方便地单击其他未知条带,根据与已知条带的密度做比较,得到未知 DNA 的含量,此方法也适用于对 PAGE 蛋白胶条带的浓度测定。在定性分析方面,识别条带的位置和形状,在不同样品之间进行条带的匹配,以发现相似性或差异性。
凝胶成像系统的种类也较为丰富。UV 凝胶成像分析系统可对蛋白电泳凝胶、DNA 凝胶样品进行图象采集并进行定性和定量分析,适用于 EB、SYBR Gold 等多种染色的核酸监测以及考染等蛋白质凝胶检测。蓝光凝胶成像分析系统以蓝光为激发光源,可取代 UV,减少紫外对人体的伤害。
总之,凝胶成像系统为分子生物学研究提供了强大的工具,极大地提高了实验数据处理的速度和准确性。
九、核酸蛋白分析仪定量检测
核酸蛋白分析仪是分子生物学实验室常用设备,主要用于测定和分析核酸(如 DNA 和 RNA)以及蛋白质的浓度和纯度。
这种设备通常利用吸光光度法或荧光法进行测量。吸光光度分析仪通过测定样品对特定波长(如 260nm 和 280nm)光的吸收程度来确定核酸和蛋白质的浓度。260nm 处的吸光度可以用来测定核酸的浓度,而 280nm 处的吸光度可以用来测定蛋白质的浓度。荧光分析仪则通过测定样品发出的荧光强度来测定核酸和蛋白质的浓度。样品首先需要与特定的荧光探针(如 PicoGreen 或 Qubit)结合,然后通过测定荧光强度来计算样品的浓度。
核酸蛋白分析仪在生物科学研究中有广泛的应用。例如,可用于测定 DNA、RNA、蛋白质的浓度和纯度,以便进行 PCR、凝胶电泳、测序、克隆、转化、转染等实验。此外,还可以用来监测样品的纯化过程,如 DNA 提取、RNA 分离或蛋白质纯化。
使用核酸蛋白分析仪时,需要注意以下几点:根据样品的类型和浓度选择合适的测定方法和设备设置。例如,如果样品浓度较低,可能需要使用荧光法进行测定。避免样品污染和设备损坏。在操作设备前,应确保设备和实验环境的清洁,并严格按照操作手册进行操作。正确解读测定结果。例如,260/280 比值和 260/230 比值可以用来评估核酸的纯度。如果这些比值偏离理想值(通常 260/280 比值为 1.8 - 2.0,260/230 比值大于 2.0),表明样品中可能存在蛋白质、酚或其他有机物的污染。正确保存和处理测定数据。所有的测定结果都应该被妥善记录和保存,以便进行后续的数据分析。
十、其他设备辅助实验
(一)制冰机
在分子生物学实验中,制冰机发挥着重要的辅助作用。实验室常用的是雪花制冰机,制冰机一般是按每日制冰量分成不同型号。雪花制冰机具有多方面的优势,其制出的冰块呈雪花状,质地轻盈,易于堆积和使用。
制冰机为分子生物学实验提供了低温环境。许多实验操作需要在低温条件下进行,以减少核酸酶或蛋白质酶的水解,保证实验结果的准确性。例如,在感受态制备过程中需要长时间冰浴,制冰机能够持续提供稳定的低温环境。在细胞培养和疫苗制备等生物实验中,制冰机也起着关键作用。在细胞培养中,需要控制培养物的温度,制冰机提供的低温环境有助于细胞培养的成功。在疫苗制备过程中,对病毒或细菌进行灭活或减毒处理需要在一定的温度条件下进行,制冰机可以提供稳定的低温环境,确保处理过程中的温度控制。此外,在疫苗的储存和运输过程中,制冰机可以提供稳定的低温环境,保证疫苗的效价和稳定性。
(二)微波炉
微波炉在分子生物学实验中也有一定的辅助作用。微波炉便于一些溶液的快速加热和定温加热,如电泳琼脂糖凝胶配制、溶化等。根据搜索到的资料,微波炉加热能力强,可适用于植物学、动物学、分子生物学、新材料学、药剂学、医学、化学、石油化工学、食品学、考古学等领域。在高校、研究所、材料、冶金企业等实验室中也得到深入的应用。其操作起来方便简洁,适用于高校、研究所进行化学、生物等方面试验,适用于微波合成、微波溶样、微波水解、微波催化等领域。
例如,在一些实验中,需要快速加热溶液以达到特定的实验条件。微波炉能够在短时间内将溶液加热到所需温度,提高实验效率。然而,使用微波炉时也需要注意一些事项。忌用金属器皿,因为放入炉内的铁、铝、不锈钢、搪瓷等器皿,微波炉在加热时会与之产生电火花并反射微波,既损伤炉体又加热不熟食物。忌使用封闭容器,加热液体时应使用广口容器,因为在封闭容器内食物加热产生的热量不容易散发,使容器内压力过高,易引起爆破事故。
(三)工作环境保障设备
超净工作台:超净工作台为分子生物学无菌操作提供可能,分为垂直送风和水平送风两种。超净台由三相电机作鼓风动力,功率 145 - 260W 左右,将空气通过由特制的微孔泡沫塑料片层叠合组成的 “超级滤清器” 后吹送出来,形成连续不断的无尘无菌的超净空气层流,即所谓 “高效的特殊空气”,它除去了大于 0.3μm 的尘埃、真菌和细菌孢子等等。超净空气的流速为 24 - 30m/min,这已足够防止附近空气可能袭扰而引起的污染,这样的流速也不会妨碍采用酒精灯或本生灯对器械等的灼烧消毒。工作人员就在这样的无菌条件下操作,保持无菌材料在转移接种过程中不受污染。
生物安全柜:分子实验中涉及的试剂和样品很多是有毒的,对于操作人员来说伤害较大。为了防止有害悬浮微粒、气溶胶的扩散,可以利用生物安全柜对操作人员、样品及样品间交叉感染和环境提供安全保护。
(四)安全防护设备
洗眼装置:在紧急情况下,如实验过程中化学试剂溅入眼睛,洗眼装置可以迅速提供冲洗眼睛的水流,减少化学试剂对眼睛的伤害。
紧急喷淋:当实验人员身体被大量化学试剂溅到或发生火灾等紧急情况时,紧急喷淋可以提供全身冲洗,降低伤害程度。
总之,制冰机、微波炉、工作环境保障设备和安全防护设备等在分子生物学实验中虽然不是核心设备,但它们在辅助实验操作、提供特定环境和保障实验人员安全等方面发挥着重要的作用。