实验外包检测公司常用的细胞活性检测方法

在生命科学研究和生物医药领域，准确检测细胞活性至关重要。实验外包检测公司通常会采用多种方法来评估细胞的活性，以下为大家介绍几种常见的方法。

一、MTT 法

MTT 法是一种广泛应用的细胞活性检测方法。

原理：活细胞内的线粒体脱氢酶能够将黄色的 MTT（3-(4,5 - 二甲基噻唑 - 2)-2,5 - 二苯基四氮唑溴盐）还原为不溶性的蓝紫色甲臜（Formazan）结晶。通过溶解甲臜结晶并测定其在特定波长下的吸光度值，可以间接反映出活细胞的数量。

步骤：

将细胞接种在 96 孔板中，培养一段时间。

加入 MTT 溶液，继续培养。

小心吸去上清液，加入 DMSO 等有机溶剂溶解甲臜结晶。

用酶标仪测定吸光度值。

优点：操作相对简单，成本较低，可用于大规模筛选。

缺点：MTT 具有一定的毒性，且形成的甲臜结晶需要有机溶剂溶解，可能会对细胞产生影响。

二、CCK-8 法

CCK-8 法是一种基于 WST-8 的细胞活性检测方法。

原理：WST-8 在电子载体 1 - 甲氧基 - 5 - 甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的橙黄色甲臜产物。生成的甲臜量与活细胞数量成正比，通过测定其在特定波长下的吸光度值可反映细胞活性。

步骤：

与 MTT 法类似，将细胞接种在 96 孔板中培养。

加入 CCK-8 溶液，继续培养。

直接用酶标仪测定吸光度值，无需溶解步骤。

优点：使用方便，无需有机溶剂溶解，对细胞毒性小，可重复性高。

缺点：价格相对较高。

三、台盼蓝拒染法

原理：台盼蓝是一种不能透过活细胞正常细胞膜的染料。当细胞受损或死亡时，细胞膜的完整性被破坏，台盼蓝可进入细胞内使其着色。而活细胞由于细胞膜完整，能够排斥台盼蓝的进入，从而保持未染色状态。

步骤：

将细胞悬液与台盼蓝溶液混合。

用血细胞计数板在显微镜下观察并计数染色和未染色的细胞。

优点：操作简单、快速，可直接观察细胞状态。

缺点：主观性较强，依赖人工计数，不适用于大规模检测。

四、ATP 生物发光法

原理：细胞内的 ATP 含量与细胞活性密切相关。利用荧光素酶与荧光素在 ATP 的作用下发生生物发光反应，通过测定发光强度可以间接反映细胞内 ATP 的含量，从而评估细胞活性。

步骤：

裂解细胞，释放出 ATP。

加入荧光素酶和荧光素试剂。

用发光检测仪测定发光强度。

优点：灵敏度高，检测速度快。

缺点：需要专用的检测设备，成本较高。

实验外包检测公司会根据不同的实验需求和细胞类型选择合适的细胞活性检测方法。在选择检测方法时，需要考虑方法的准确性、可靠性、操作简便性以及成本等因素。同时，不同的检测方法可能会受到实验条件、细胞状态等因素的影响，因此在进行细胞活性检测时，需要严格控制实验条件，确保检测结果的准确性和可靠性。