流式细胞分选

应用简介

用免疫磁珠做细胞分选(MACS)是高效简捷的免疫细胞及其它细胞的分离纯化方法。已包被一抗的磁珠与细胞表面相应分子特异性结合，或者已包被二抗(羊抗小鼠或羊抗大鼠)的磁珠与预先已与细胞表面分子特异结合的一抗结合。磁珠携带与之结合的细胞吸附于分离柱/试管上，实现阳性细胞分离或阴性细胞的分离。

技术原理

流式分选：当经荧光染色或标记的单细胞悬液放入样品管中，被高压压入流动室内。流动室内充满鞘液，在鞘液的包裹和推动下，细胞被排成单列，以一定速度从流动室喷口喷出。在流动室的喷口上配有一个超高频的压电晶体，充电后振动，使喷出的液流断裂为均匀的液滴，待测细胞就分散在这些液滴之中。将这些液滴充以正、负不同的电荷，当液滴流经过带有几千伏的偏转板时，在高压电场的作用下偏转，落入各自的收集容器中，没有充电的液滴落入中间的废液容器，从而实现细胞的分离。

磁珠分选：免疫磁珠细胞分选法是把细胞用超级顺磁性的(MACS微型磁珠)特异性地标记，磁性标记完后，把这些细胞通过一个放在强而稳定磁场中的分选柱。分选柱里的基质造成一个高梯度磁场。被磁性标记的细胞滞留在柱里而未被标记的细胞则流出。当分选柱移出磁场后，滞留柱内的磁性标记细胞就可以被洗脱出来，这样就完全可以获得标记和未标记的两个细胞组份。

实验方法

本次实验是用免疫磁珠做细胞分选(MACS)。实验流程如下：

技术总结

1、如果分离细胞用作培养，全过程在超净台中完成。

2、超微磁珠及微小磁场系统适合于少量细胞分离(如106-107)，通常已适用于大多数实验研究；此外各公司尚有大磁珠及大磁场供应，可用于更大量细胞的分选；除分离柱外，也有试管及其它设备用于分选；根据我们应用的经验，分离柱由于提供了较大的接触面，在细胞分选上具有较多优点。磁场也可以自制，用一般的磁铁即可做成简易磁场，可提供足够的磁力。

3、磁珠分离系统分离的细胞纯度可以达到80~99％，得率在60~90％左右，仅次或相当于流式细胞仪（FACS）的分选效率，与FACS相比，MACS设备简单，耗时极短，故而应用广泛。MACS也可用做FACS分选前的预分离，以减少FACS所用时间。另外连续两次过柱分选可进一步提高分选细胞纯度，通常可达95－99％。

4、在分离柱尾接上限速针头，收集的首次流下的细胞即为阴性选择细胞，一般纯度低于阳性选择。

5、分离柱一般只能一次应用，再用时降低分离效率；

6、分选下的细胞可用荧光标记抗体(一抗或二抗)标记后FACS鉴定纯度；我们用荧光抗体直接标记细胞后，用二抗包被磁珠分选出细胞，直接做FACS分析，也可实现分选和纯度检测。

7、阳性选择后，如需用第二种表面标志继续分离，可以用剪切酶剪切下之结合的磁珠和一抗，再次进行下一轮分选。如需进行细胞功能分析，也可经培养12~24小时，使结合的磁珠脱落后进一步使用阳选的细胞做研究。