shRNA载体构建

技术原理

首先设计根据需求设计shRNA引物一套，完成引物退火。将载体进行双酶切反应，双酶切后割胶回收。将shRNA和双酶切回收后的载体，使用试剂盒进行重组成环状片段，转入制备好的细菌感受态细胞，对长出的单克隆菌落送测序公司进行测序鉴定，比对正确的克隆即为构建成功的shRNA表达载体。

shRNA的靶点选择决定着对靶向基因的表达敲低效果，通常涉及3-4个shRNA靶点同时进行实验，根据后续检测结果确定最佳靶点后，安排后续实验。

实验方法 

技术总结

体内抑制效果强：

shRNA表达载体生物体内的抑制效果强于普通合成的siRNA，且能与组织特异性定位启动子协同作用。 

诱导表达功能：

科研人员可以通过shRNA表达载体服务建立可诱导表达系统，控制siRNA的表达。

转染细胞易富集：

载体上可附加抗生素抗性，筛除未转染的细胞，轻松富集有沉默潜力的细胞。

干扰效果长期有效：

shRNA表达载体能帮助研究人员获得稳定细胞系，并保证RNA干扰的长期性。 

实验操作简便：

shRNA表达载体将以质粒的形式寄给客户，这种形式比一般合成的siRNA更加稳定，操作也更加简单。同时，由于载体可重复操作，客户使用更加方便。 

优惠的价格：

shRNA表达载体的可重复操作性降低了其高通量应用的价格，满足了siRNA客户的大量需求。 

可用于基因治疗：

构建在病毒载体上的shRNA能被应用于感染基因治疗核心细胞系。