脊髓损伤模型

应用简介

脊髓损伤的修复与治疗是医学界面临的一大难题。脊髓损伤模型种类繁多，各有其优缺点，在应用时应根据具体实验研究目的和条件作出科学的选择。目前，国内脊髓损伤实验研究最常选用的动物是大白鼠、兔、猫、犬。体型较大的动物在实际的实验操作中存在如下不利因素：手术操作步骤相对复杂，切口容易感染，容易死于术后的脊髓损伤并发症，一定程度影响了实验结果。大鼠作为一种价格便宜、容易饲养的动物，作为制作脊髓损伤模型还有如下特点：再现性好；临床相关性好；与人类高度同源性；重复性强；适应范围广；操作简单；死亡率低等。常见的脊髓损伤动物模型有脊髓撞击损伤模型、脊髓压迫损伤模型、脊髓切割损伤模型、切除型脊髓损伤模型等。

肺纤维化模型构建

目前肺纤维化动物模型可分为基应相关模型与非基因模型，前者主要是指工程动物模型，非基因模型主要指在相同或相似的遗传背景下，通过环境因素，药物/毒物或其它因素诱导得到的肺纤维化模型。

肝纤维化常用模型有化学毒性试剂诱导法（四氯化碳诱导，硫代乙酰胺诱导），胆管阻塞法（胆管结扎或寄生虫），乙醇诱导法以及免疫法。

实验方法

一、Allen’s脊髓损伤模型建立

①取成年雌性SD大鼠（220～250g），用2%戊巴比妥钠（30mg/kg）腹腔内注射麻醉、固定（包括头部）。备皮消毒后，在无菌条件下切开皮肤、浅筋膜。

②用器械沿T8～T10两侧棘突顺竖脊肌群走向钝性分离肌肉和韧带，清晰暴露T9棘突和椎弓，有齿镊轻提T9棘突，用眼科剪沿T9、T10椎弓间隙轻轻咬开椎弓根部，并逐渐咬除T9椎弓，暴露T10段脊髓。

③采用改良的Allen装置，打击装置整合于立体定位仪上，将一打击面直径为3mm圆形薄铜垫片（面积7.075mm2，重量0.1g）置于T10节段脊髓表面，以重10g的砝码自5cm高处自由坠落打击该垫片，致伤量为50g·cm，造成T10节段脊髓的冲击伤。

④撞击成功后会发现大鼠后肢伸展，尾巴左右摇晃。手术结束，再次消毒，逐层缝合肌肉、皮肤。假手术组4只仅行棘突和椎板切除，不损伤脊髓，大鼠无行为学及后肢运动功能改变。

⑤术后动物被放在30℃的加热垫上复苏，待清醒后室温饲养，自由饮食。截瘫大鼠膀胱区人工按压排尿，每天2次，直到膀胱排空功能恢复，防止并发症。

二、切除型脊髓损伤模型

①室温条件下以6%水合氯醛(30 mg/kg)腹腔内注射麻醉两组大鼠，外科备皮，固定于鼠板，外科消毒，铺无菌巾；

②沿背正中线切开背部皮肤，锐性分离筋膜、椎旁肌肉，咬除T8-9椎板，暴露T7脊髓节段，在手术显微镜下，沿脊髓后正中线剪开硬脊膜，并固定在临近肌肉组织上。

③切割脊髓损伤模型组使用10号刀片在显露的脊髓中间位置横向切断脊髓，刀片要触及椎管前壁和侧壁骨面，一次性切割脊髓，但并不移除组织，然后逢合肌肉，皮肤；

④切除脊髓损伤模型组使用显微外科剪刀将一段长约5 mm脊髓全部剪断，然后用吸引器于软膜下吸断未横断的脊髓组织，用10号刀片反复刮脊柱内表面以去除残留组织与纤维，由与手术无关人员确认此段无组织残留，术中采用压迫和电凝进行止血，8-0显微缝合线缝合硬脊膜，然后逢合肌肉，皮肤。

⑤术后处理：术后严密观察及记录动物精神状态、饮食、尿便、肢体水肿、压疮、泌尿系统感染等情况。给予青霉素20×104 U/次，2次/d，按摩膀胱3次/d，直到膀胱排尿反射功能基本恢复，防止泌尿系统及其他并发症的发生。

术后护理操作方法：实验人员双手戴上棉布厚手套，左手以麻醉大鼠的手法抓取固定大鼠（但是需注意不要过度用力，以免挤压到背部伤口或大鼠胸腔），右手手掌托住大鼠腹背部，右手食指摸索找到膀胱，适当用力挤压膀胱，尿液就会从尿道流出。术后需每天排尿一次，并使用75%酒精在尿道附近喷洒消毒，卫生纸擦拭干净尿道周围污渍。如果护理情况良好，一般术后一周，大鼠会恢复自主排尿功能。前期护理过程中，大鼠可能会尿血，属正常现象。